Genética y Bioquímica de Rhizobacterias
Jefe de Laboratorio: Dra. Angeles Zorreguieta
Metodología que se utiliza
Para determinar los factores que intervienen en las propiedades de adhesión de Rhizobium y Brucella utilizamos un enfoque mutacional y análisis de los fenotipos asociados tanto in vitro como in vivo (durante la interacción con la célula hospedadora). Dada la redundancia funcional que pueden presentar algunas adhesinas recurrimos también al estudio del efecto de la sobre-expresión de los genes blanco tanto en la bacteria original como en sistemas heterólogos. La localización de las adhesinas de naturaleza proteica se realiza por inmunofluorescencia y microscopía confocal.
Para evaluar la expresión in situ de genes clave en la formación del biofilm, se utilizan fusiones transcripcionales a derivados inestables de GFP y microscopía confocal. Para definir el rol de proteínas extracelulares sobre la estructura del EPS, el polisacárido producido por diferentes cepas mutantes se analiza por microscopía de fuerza atómica.
Por último, con el fin de analizar la eficiencia del silenciamiento de genes bacterianos se diseñan EGSs complementarios a regiones simple cadena del ARN mensajero blanco y se ensaya a través de enfoques in vitro e in vivo la capacidad de inactivación del mensajero y de conversión fenotípica.