Ciclo Celular y Estabilidad Genómica
Jefe de Laboratorio: Dra. Vanesa Gottifredi
Metodología que se utiliza
Las aproximaciones experimentales se agrupan en 3 categorías básicas:
a) el análisis de niveles e interacciones proteicas: se destaca la medición de vida media de proteínas, la identificación y cuantificación de niveles ubiquitinación no degradativa y degradativa de proteínas, la medición de interacciones entre proteínas asociadas a cromatina, la utilización de siRNA para regular negativamente blancos específicos.
b) los estudios de localización subnuclear y los análisis de movilidad proteica en células vivas: monitoreamos cambios en la localización subnuclear de distintas proteínas y utilizamos criterios de cuantificación adaptados a cada factor específico analizado. Aplicamos técnicas de irradiación UV global y local a través de filtros de polincarbonato y de irradiación con partículas alfa. Se realizan estudios en células vivas monitoreando la movilidad de proteínas fusionadas a etiquetas fluoresencentes. Estos últimos incluyen el análisis espacial y la irradiación local utilizando microscopía de dos fotones.
c) los estudios de consecuencias biológicas asociadas a alteraciones de las vías estudiada: somos expertos en el manejo de citometría de flujo asociada a ciclo celular. Además, para lograr una detección directa de TLS, aplicamos una técnica, llamada DNA combing o ensayo de fibras, que permite cuantificar la velocidad de progresión de horquillas de replicación individuales. También aplicamos un ensayo funcional de evaluación de frecuencia de mutaciones que puede resultar de alteraciones en el proceso de tolerancia.