Biología Vegetal
Jefe de Laboratorio: Dr. Ricardo A. Wolosiuk
Metodología que se utiliza
Nuestro laboratorio estableció que una proteína vegetal asociada al estrés oxidativo -2-Cys Peroxirredoxinas (2-Cys Prx)- estimula la actividad de la fructosa-1,6-bisfosfatasa de los cloroplastos y, además, posee una actividad chaperona. La identificación de estas nuevas actividades implicó un cambio en la visión clásica de las la 2-Cys Prxs, peroxidasas desprovistas de grupo prostético. No sólo la 2-Cys Prx es un catalizador para la reducción de los hidroperóxidos (e.g. H2O2) sino también interacciona no-covalentemente con otras proteínas. Sobre estas bases, establecimos posteriormente que los nucleótidos modulan a las 2-Cys Prxs de E.coli, S. typhimurium y S. mansoni. En particular, la acción concertada del ATP y el Mg2+ inhibe la actividad peroxidasa y, además, conduce la estructura cuaternaria a ensamblados de gran tamaño (radio hidrodinámico: 69 nm) que retornan a la forma original (radio hidrodinámico: 13.8 nm) cuando son removidos los moduladores. Estos resultados difieren del actual consenso que vincula la oligomerización de la 2-Cys Prx solamente con el estado redox de los residuos cisteína. Por ello, para caracterizar los aspectos estructurales y funcionales de las 2-Cys Prx
(1) preparamos múltiples variantes por ingeniería genética
(2) determinamos las actividades asociadas por los procedimientos adecuados
(3) estimamos aspectos estructurales vía técnicas espectroscópicas (dicroismo circular), hidrodinámicas (HPLC), visuales (microscopía electrónica de transmisión)
El conjunto de estos datos aporta las evidencias experimentales de la transformación de las uniones covalentes y la modificación de las interacciones no-covalentes que regulan las funciones y la estructura de la 2-Cys Prx.